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    五种疾病的血清蛋白电泳谱特点

    [导读]对 A/G 异常血清蛋白的进行电泳分析, 有助于了解不同疾病中血清蛋白组分的变化情况, 对疾病的临床诊断及疗效观测有较大价值。

    血清白/球蛋白(albumin/ g lobulin , A/G)比值已广泛应用于临床疾病的诊断中 。其正常范围一般为1 .5 ≤A/G ≤2 .7 。血清 A/G 比值倒置(A/G <1)对肝脏疾病的诊断价值已得到人们的广泛认同,但 A/G比值异常时(1 ≤A/G <1 .5)对疾病的指导作用及其血清蛋白电泳谱的变化还少有报道。为了解 A/G 比值异常与患者疾病的关系及其血清组分的变化 ,现用法国 SEBIA 全自动电泳仪采用琼脂糖凝胶电泳法检测血清蛋白组分 , 同时测白蛋白(albumin , A LB)、总蛋白(total protein , TP)含量。现报道如下。

    资料与方法

    1 .对象:(1)观察组 :随机选择 113 例我院 2005年 4 ~ 5 月期间肝功检测 A/G 比值异常的住院患者,年龄 19 ~ 94 岁 。男 71 例, 女 42 例。按临床病例类型及蛋白检测结果归类为低蛋白血症型(17 例)、肾病型(25 例)、肝病型(25 例)、急性炎症及急性时相反应型(16 例)、慢性炎症型(21 例)等谱型[ 1]。(2)健康对照组:健康体检者 50 例, 年龄 18 ~ 55 岁(平均 31 ±10岁), 均为我院健康体检者 。

    2 .仪器与试剂:(1)采用日立 7060 全自动生化分析仪 ,A LB 、TP 试剂盒由上海复星公司提供, 标准品试剂盒自带。(2)采用法国 SEBIA 全自动电泳仪及HYRYS2 全自动扫描仪 , 系统配套用琼脂糖蛋白电泳试剂盒(15/30 人份)、洗脱液 、脱色液 、系统自带校准胶片。

    3 .方法:(1)标本收集:抽取空腹血 3ml ,尽快分离血清检测 A LB 、TP ,并收集血清于 4 ℃保存(若血清保存时间较长,应于-20 ℃冷冻保存), 批量进行琼脂糖凝胶血清蛋白电泳, 血清无溶血、脂血 、黄疸。(2)用双缩脲法测 TP , BCG 法检测 A LB , 校准品为朗道298UN ,结果符合质控标准 。(3)琼脂糖凝胶血清蛋白电泳,严格按照试剂盒说明操作。(4)统计学处理数据 ,正常对照组 95 %可信区间用 x ±1 .96s 表示,其余均数用 x ±s 表示, 组间比较均采用 t 检验, P <0 .05或 P <0 .01 示差异有统计学意义 。

    结 果

    1 .正常对照组 TP 、A LB 、A/G 的 95 %可信区间 ,见表 1


    2 .113 例 A/G 比值异常血清蛋白与健康对照组的电泳结果,见表 2 。

    讨 论

    血清蛋白区带电泳是临床实验室中的常用技术之一 ,可定性或半定量检测正常或异常蛋白区带,Hydrag el 蛋白质试剂盒采用 pH 8 .8 的缓冲液琼脂糖为固定支持物 , 由于其具有微细的多孔网状结构,除能产生电泳作用外 ,还具有分子筛效应, 可提高其分辨率,不吸附蛋白, 无拖尾现象 。蛋白质在电场中可自由穿透,阻力小 ,分离清晰, 透明度高, 能透过 200~ 700nm 的光线,电泳后无须透明,大大提高了检测的灵敏度。SEBIA 电泳仪其批内、批间的重复性及扫描仪对胶片的扫描重复性均较好, 说明 SEBIA 电泳仪及HYRYS2 扫描仪具有良好的准确性、精密度、重复性。

    琼脂糖蛋白电泳图谱可以全面 、直观地反映血清蛋白的概貌。在低蛋白血症中由于胃肠道功能紊乱,蛋白质摄入减少或排出增多而导致营养不良或由于外伤引起白蛋白大量丢失 ,故电泳图谱表现为白蛋白比例明显下降 ;α1球蛋白中主要是α1 抗胰蛋白酶和α1酸性糖蛋白, 在急性时相反应时升高 , 与急性时相反应蛋白α1 糖蛋白升高有关 ;α2 球蛋白升高可能为代偿白蛋白降低所引起的血浆渗透压下降, 同时表明有炎症存在 ;γ球蛋白带含有炎性介质 C 反应蛋白(Creactivepro tein , CRP), 机体抵抗力下降反应性继发感染而引起 CRP 对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用而反应性升高[ 1]

    ;肾病型图谱表现为 α1 、α2 球蛋白和 γ球蛋白升高 ,慢性肾病患者 γ球蛋白升高尤为明显 。各种急慢性肾病患者由于肾小球滤过率增加,出现不同程度的蛋白尿 ,常导致血浆蛋白降低, 各组分的比例发生变化。α1 球蛋白升高 ,主要是小分子量的急性时相反应蛋白 α1 糖蛋白升高 ,α2 球蛋白升高可能为代偿白蛋白降低所引起的血浆渗透压下降和低密度脂蛋白相对增高所致 ,肾病多属于免疫介导性炎症疾病[ 2], 而 γ球蛋白的主要成分是 IgG 、IgM , 其升高可能是由于免疫刺激使 IgG 升高所致。本研究将肝病分为各型肝炎、肝硬化 、肝癌 3 组,与正常对照组相比 , 3 组的 α1 球蛋白均无显著性差异,但肝癌患者 α1 球蛋白与其余两组相比较增加相对明显。 3 组白蛋白 、α2 球蛋白、β 球蛋白、γ球蛋白与正常对照组相比, 差异均有统计学意义(P <0 .05)。3 组血清白蛋白、β 球蛋白均下降 , 白蛋白下降显著 ,这与肝细胞内质网受损逐渐严重、合成白蛋白功能逐渐降低有关, 而且白蛋白是反相急性时相反应蛋白 ,在炎症时反而减低 。慢性肝炎、肝硬化组 α2 球蛋白显著下降 ,可能是由于肝损伤导致结合珠蛋白合成降低所致,而肝癌组 α2 球蛋白显著上升, 在与恶性肿瘤时细胞分裂增加,产生的多种“急性相反应物质” 蛋白群集中于 α2 球蛋白区有关 , 表现为应激反应型蛋白电泳图谱分型, 有助于良 、恶性肝病的鉴别诊断 。慢性肝炎转化为肝硬化后白蛋白显著下降, γ球蛋白显著上升,表现为肝硬化所特有的慢性肝损害型蛋白电泳图谱。随着肝病病程的发展 ,血清中白蛋白的含量逐渐下降 ,γ球蛋白的含量逐渐上升。在各类肝炎患者中 ,α1 、α2 球蛋白和β 球蛋白变化不明显 ,而肝硬化患者电泳图谱多数可见 β-γ桥 ,α1 、α2 球蛋白常下降 。肝癌患者α1 球蛋白则明显增加[ 3] 。可见, 血清蛋白电泳分析在鉴别诊断肝病 、判断肝病患者的病程发展 、治疗效果及预后情况中有着重要的诊断意义[ 4] 。

    在炎症患者图谱中 ,由于白蛋白是一负急性时相蛋白 ,在炎症或应激反应时减低;同时由于蛋白分解亢进 。而 α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白等急性时相反应蛋白显著增加, 故电泳图谱的显著特征为白蛋白降低 ,α1 、α2 球蛋白增加, β球蛋白、γ球蛋白与正常组对照差异无统计学意义(P>0 .05)。当炎症转为慢性时明显升高 。可见, 电泳图谱也可作为反映炎症的一个比较灵敏的指标 。慢性炎症型与急性炎症型图形特征相似 ,但 β 球蛋白 、γ球蛋白与正常组对照差异有统计学意义(P <0 .05)。

    血清 TP 、A LB 含量及 A/G 比值对临床疾病的诊断 、监测和预后判断有重要的意义 ,而临床医生经常抱怨A/G 比值结果异常。从本组中可以看出 , A/G 比值结果异常有两方面原因:第一是现在 A/G 正常范围采用《实用临床检验》的旧标准 ,而现在随着检验技术的发展和提高 ,旧标准已不适用, 而应制定新的标准 。本组采用本室制定的新 A/G 标准为 1 .30 ~ 2 .07(另文报道), 这样大大降低了 A/G 异常的假象。第二是由于患者体内的白蛋白 、球蛋白组分随着病程的进展而发生不同变化 ,从而导致 A/G 异常 。而 A/G 异常与其疾病的类型和病程密切相关。各平持续升高且大于 200 mg/ L 的患者,其 A MI 后心脏破裂的发生率非常高。因此 , 在临床上 CRP 作为急性心肌梗死、不稳定型心绞痛和心血管意外事件的预报因子是敏感和可靠的[ 7] 。


    本组研究结果显示, 各组患者 hs-CRP 浓度与对照组比较均呈显著性升高(P <0 .01), 并随冠心病的严重程度增高而增高 , 从表 1 可见冠心病由 SA P 到UAP 再到 AMI , hs-CRP 浓度依次增高,呈正相关 ,而患者由 AMI 转至恢复期,其 hs-CRP 浓度呈显著下降(P <0 .01),表明 CRP 的浓度与心血管病变有密切关系。 hs-CRP 检测对心血管疾病的危险性评价及预测心脏事件的发生有着很高的临床价值 , 与文献[ 8] 报道的随着冠脉病变狭窄程度及范围加重 , 血清 CRP相应增高 ,并且与其进展相关的结果基本一致 。

    本组还研究了 CRP 与心肌损伤及坏死指标(cTnI、CK 、CK-M B)的关系, 结果表明 , 在心肌无损伤及坏死的心绞痛组中 cTnI 、CK 、CK-M B 与对照组比较均无显著性差异 ,有微小心肌损伤的 UAP 组中 cTnI与对照组比较呈显著升高, CK 、CK-M B 仍无显著性差异 ,而有心肌坏死的 AM I 组 cTnI 、CK 、CK-M B 均呈显著增加,且非 AM I 患者组 CRP 异常率明显高于cTnI 、CK 、CK-MB ,从而提示急性冠状动脉综合征患者血清 CRP 增高与斑块破裂 、局部炎症反应有关,cTnI 是急性冠状动脉综合征中代表心肌微小损伤的指标 。近年多方面研究表明 ,斑块破裂及随之而来其表面血栓的形成是 ACS 发病的主要病理生理机制,其中斑块破裂是基础环节 。另有研究指出 ,CRP 本身可以促进单核细胞释放组织因子, 该因子是外源性凝血途径的重要启动因子, 其释放的增加势必加强局部血栓的形成 。此外,CRP 还可与低密度脂蛋白相互作用并损害细胞膜 , 同时还能激活补体系统, 促进炎症反应 。因此,CRP 不仅是反映炎症反应的指标, 其本身还具有促进炎症反应及斑块破裂 , 甚至触发局部血栓形成的作用 。

    不稳定型心绞痛极易发展至 AM I, 乃至死亡 ,所以尽早预测其发生是很有意义的, 冠状动脉病变部位的炎性反应先于心血管事件之前, 在冠心病患者中测定 hs-CRP 水平有助于对这类患者进行危险分层 ,临床中若发现血清 hs-CRP 非常高要引起高度重视 ,以防止心脏事件的发生 。总之, CRP 不仅作为炎症活动程度的一个指标,还可作为冠脉事件的强有力的预报因子 ,在预测冠心病的严重程度及心血管意外事件方面有着重要的价值 。



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    血清白/球蛋白(albumin/ g lobulin , A/G)比值已广泛应用于临床疾病的诊断中 。其正常范围一般为1 .5 ≤A/G ≤2 .7 。血清 A/G 比值倒置(A/G <1)对肝脏疾病的诊断价值已得到人们的广泛认同,但 A/G比值异常时(1 ≤A/G <1 .5)对疾病的指导作用及其血清蛋白电泳谱的变化还少有报道。为了解 A/G 比值异常与患者疾病的关系及其血清组分的变化 ,现用法国 SEBIA 全自动电泳仪采用琼脂糖凝胶电泳法检测血清蛋白组分 , 同时测白蛋白(albumin , A LB)、总蛋白(total protein , TP)含量。现报道如下。

    资料与方法

    1 .对象:(1)观察组 :随机选择 113 例我院 2005年 4 ~ 5 月期间肝功检测 A/G 比值异常的住院患者,年龄 19 ~ 94 岁 。男 71 例, 女 42 例。按临床病例类型及蛋白检测结果归类为低蛋白血症型(17 例)、肾病型(25 例)、肝病型(25 例)、急性炎症及急性时相反应型(16 例)、慢性炎症型(21 例)等谱型[ 1]。(2)健康对照组:健康体检者 50 例, 年龄 18 ~ 55 岁(平均 31 ±10岁), 均为我院健康体检者 。

    2 .仪器与试剂:(1)采用日立 7060 全自动生化分析仪 ,A LB 、TP 试剂盒由上海复星公司提供, 标准品试剂盒自带。(2)采用法国 SEBIA 全自动电泳仪及HYRYS2 全自动扫描仪 , 系统配套用琼脂糖蛋白电泳试剂盒(15/30 人份)、洗脱液 、脱色液 、系统自带校准胶片。

    3 .方法:(1)标本收集:抽取空腹血 3ml ,尽快分离血清检测 A LB 、TP ,并收集血清于 4 ℃保存(若血清保存时间较长,应于-20 ℃冷冻保存), 批量进行琼脂糖凝胶血清蛋白电泳, 血清无溶血、脂血 、黄疸。(2)用双缩脲法测 TP , BCG 法检测 A LB , 校准品为朗道298UN ,结果符合质控标准 。(3)琼脂糖凝胶血清蛋白电泳,严格按照试剂盒说明操作。(4)统计学处理数据 ,正常对照组 95 %可信区间用 x ±1 .96s 表示,其余均数用 x ±s 表示, 组间比较均采用 t 检验, P <0 .05或 P <0 .01 示差异有统计学意义 。

    结 果

    1 .正常对照组 TP 、A LB 、A/G 的 95 %可信区间 ,见表 1

    2 .113 例 A/G 比值异常血清蛋白与健康对照组的电泳结果,见表 2 。

    讨 论

    血清蛋白区带电泳是临床实验室中的常用技术之一 ,可定性或半定量检测正常或异常蛋白区带,Hydrag el 蛋白质试剂盒采用 pH 8 .8 的缓冲液琼脂糖为固定支持物 , 由于其具有微细的多孔网状结构,除能产生电泳作用外 ,还具有分子筛效应, 可提高其分辨率,不吸附蛋白, 无拖尾现象 。蛋白质在电场中可自由穿透,阻力小 ,分离清晰, 透明度高, 能透过 200~ 700nm 的光线,电泳后无须透明,大大提高了检测的灵敏度。SEBIA 电泳仪其批内、批间的重复性及扫描仪对胶片的扫描重复性均较好, 说明 SEBIA 电泳仪及HYRYS2 扫描仪具有良好的准确性、精密度、重复性。

    琼脂糖蛋白电泳图谱可以全面 、直观地反映血清蛋白的概貌。在低蛋白血症中由于胃肠道功能紊乱,蛋白质摄入减少或排出增多而导致营养不良或由于外伤引起白蛋白大量丢失 ,故电泳图谱表现为白蛋白比例明显下降 ;α1球蛋白中主要是α1 抗胰蛋白酶和α1酸性糖蛋白, 在急性时相反应时升高 , 与急性时相反应蛋白α1 糖蛋白升高有关 ;α2 球蛋白升高可能为代偿白蛋白降低所引起的血浆渗透压下降, 同时表明有炎症存在 ;γ球蛋白带含有炎性介质 C 反应蛋白(Creactivepro tein , CRP), 机体抵抗力下降反应性继发感染而引起 CRP 对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用而反应性升高[ 1]

    ;肾病型图谱表现为 α1 、α2 球蛋白和 γ球蛋白升高 ,慢性肾病患者 γ球蛋白升高尤为明显 。各种急慢性肾病患者由于肾小球滤过率增加,出现不同程度的蛋白尿 ,常导致血浆蛋白降低, 各组分的比例发生变化。α1 球蛋白升高 ,主要是小分子量的急性时相反应蛋白 α1 糖蛋白升高 ,α2 球蛋白升高可能为代偿白蛋白降低所引起的血浆渗透压下降和低密度脂蛋白相对增高所致 ,肾病多属于免疫介导性炎症疾病[ 2], 而 γ球蛋白的主要成分是 IgG 、IgM , 其升高可能是由于免疫刺激使 IgG 升高所致。本研究将肝病分为各型肝炎、肝硬化 、肝癌 3 组,与正常对照组相比 , 3 组的 α1 球蛋白均无显著性差异,但肝癌患者 α1 球蛋白与其余两组相比较增加相对明显。 3 组白蛋白 、α2 球蛋白、β 球蛋白、γ球蛋白与正常对照组相比, 差异均有统计学意义(P <0 .05)。3 组血清白蛋白、β 球蛋白均下降 , 白蛋白下降显著 ,这与肝细胞内质网受损逐渐严重、合成白蛋白功能逐渐降低有关, 而且白蛋白是反相急性时相反应蛋白 ,在炎症时反而减低 。慢性肝炎、肝硬化组 α2 球蛋白显著下降 ,可能是由于肝损伤导致结合珠蛋白合成降低所致,而肝癌组 α2 球蛋白显著上升, 在与恶性肿瘤时细胞分裂增加,产生的多种“急性相反应物质” 蛋白群集中于 α2 球蛋白区有关 , 表现为应激反应型蛋白电泳图谱分型, 有助于良 、恶性肝病的鉴别诊断 。慢性肝炎转化为肝硬化后白蛋白显著下降, γ球蛋白显著上升,表现为肝硬化所特有的慢性肝损害型蛋白电泳图谱。随着肝病病程的发展 ,血清中白蛋白的含量逐渐下降 ,γ球蛋白的含量逐渐上升。在各类肝炎患者中 ,α1 、α2 球蛋白和β 球蛋白变化不明显 ,而肝硬化患者电泳图谱多数可见 β-γ桥 ,α1 、α2 球蛋白常下降 。肝癌患者α1 球蛋白则明显增加[ 3] 。可见, 血清蛋白电泳分析在鉴别诊断肝病 、判断肝病患者的病程发展 、治疗效果及预后情况中有着重要的诊断意义[ 4] 。

    在炎症患者图谱中 ,由于白蛋白是一负急性时相蛋白 ,在炎症或应激反应时减低;同时由于蛋白分解亢进 。而 α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜蓝蛋白等急性时相反应蛋白显著增加, 故电泳图谱的显著特征为白蛋白降低 ,α1 、α2 球蛋白增加, β球蛋白、γ球蛋白与正常组对照差异无统计学意义(P>0 .05)。当炎症转为慢性时明显升高 。可见, 电泳图谱也可作为反映炎症的一个比较灵敏的指标 。慢性炎症型与急性炎症型图形特征相似 ,但 β 球蛋白 、γ球蛋白与正常组对照差异有统计学意义(P <0 .05)。

    血清 TP 、A LB 含量及 A/G 比值对临床疾病的诊断 、监测和预后判断有重要的意义 ,而临床医生经常抱怨A/G 比值结果异常。从本组中可以看出 , A/G 比值结果异常有两方面原因:第一是现在 A/G 正常范围采用《实用临床检验》的旧标准 ,而现在随着检验技术的发展和提高 ,旧标准已不适用, 而应制定新的标准 。本组采用本室制定的新 A/G 标准为 1 .30 ~ 2 .07(另文报道), 这样大大降低了 A/G 异常的假象。第二是由于患者体内的白蛋白 、球蛋白组分随着病程的进展而发生不同变化 ,从而导致 A/G 异常 。而 A/G 异常与其疾病的类型和病程密切相关。各平持续升高且大于 200 mg/ L 的患者,其 A MI 后心脏破裂的发生率非常高。因此 , 在临床上 CRP 作为急性心肌梗死、不稳定型心绞痛和心血管意外事件的预报因子是敏感和可靠的[ 7] 。

    本组研究结果显示, 各组患者 hs-CRP 浓度与对照组比较均呈显著性升高(P <0 .01), 并随冠心病的严重程度增高而增高 , 从表 1 可见冠心病由 SA P 到UAP 再到 AMI , hs-CRP 浓度依次增高,呈正相关 ,而患者由 AMI 转至恢复期,其 hs-CRP 浓度呈显著下降(P <0 .01),表明 CRP 的浓度与心血管病变有密切关系。 hs-CRP 检测对心血管疾病的危险性评价及预测心脏事件的发生有着很高的临床价值 , 与文献[ 8] 报道的随着冠脉病变狭窄程度及范围加重 , 血清 CRP相应增高 ,并且与其进展相关的结果基本一致 。

    本组还研究了 CRP 与心肌损伤及坏死指标(cTnI、CK 、CK-M B)的关系, 结果表明 , 在心肌无损伤及坏死的心绞痛组中 cTnI 、CK 、CK-M B 与对照组比较均无显著性差异 ,有微小心肌损伤的 UAP 组中 cTnI与对照组比较呈显著升高, CK 、CK-M B 仍无显著性差异 ,而有心肌坏死的 AM I 组 cTnI 、CK 、CK-M B 均呈显著增加,且非 AM I 患者组 CRP 异常率明显高于cTnI 、CK 、CK-MB ,从而提示急性冠状动脉综合征患者血清 CRP 增高与斑块破裂 、局部炎症反应有关,cTnI 是急性冠状动脉综合征中代表心肌微小损伤的指标 。近年多方面研究表明 ,斑块破裂及随之而来其表面血栓的形成是 ACS 发病的主要病理生理机制,其中斑块破裂是基础环节 。另有研究指出 ,CRP 本身可以促进单核细胞释放组织因子, 该因子是外源性凝血途径的重要启动因子, 其释放的增加势必加强局部血栓的形成 。此外,CRP 还可与低密度脂蛋白相互作用并损害细胞膜 , 同时还能激活补体系统, 促进炎症反应 。因此,CRP 不仅是反映炎症反应的指标, 其本身还具有促进炎症反应及斑块破裂 , 甚至触发局部血栓形成的作用 。

    不稳定型心绞痛极易发展至 AM I, 乃至死亡 ,所以尽早预测其发生是很有意义的, 冠状动脉病变部位的炎性反应先于心血管事件之前, 在冠心病患者中测定 hs-CRP 水平有助于对这类患者进行危险分层 ,临床中若发现血清 hs-CRP 非常高要引起高度重视 ,以防止心脏事件的发生 。总之, CRP 不仅作为炎症活动程度的一个指标,还可作为冠脉事件的强有力的预报因子 ,在预测冠心病的严重程度及心血管意外事件方面有着重要的价值 。

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